Όταν ήταν μόλις δύο ημερών,ασθένησε από μία λοίμωξη. Αποδείχθηκε ότι ήταν η πρώτη από τις πολλές λοιμώξεις που θα προβλημάτιζαν τους γονείς και τους γιατρούς της μέχρι να γίνει 26 μηνών, όταν τελικά διαγνώστηκε με ανεπάρκεια απαμινάσης αδενοσίνης (ADA), μια μορφή σοβαρής συνδυασμένης νόσου ανοσοανεπάρκειας (SCID).
https://www.youtube.com/watch?v=IgES04-cSr8
Όπως και άλλα παιδιά με τη διαταραχή, το DeSilva ξεκίνησε με πεγκυλιωμένη ADA (PEG-ADA), μια ενζυμική θεραπεία που εμφανίστηκε τη δεκαετία του 1980. Η θεραπεία λειτούργησε αρκετά καλά για να κερδίσει βάρος, να αναπτύξει φυσιολογικό αριθμό περιφερικών Τ-κυττάρων και να αντιμετωπίσει λιγότερες λοιμώξεις. Ωστόσο, η ανοσολογική της ανεπάρκεια επέμεινε.
Σε ηλικία τεσσάρων ετών, ο DeSilva έγραψε ιστορία στις 12:52 μ.μ. στις 14 Σεπτεμβρίου 1990, ως ο πρώτος ασθενής που υποβλήθηκε σε εγκεκριμένη εφαρμογή γονιδιακής θεραπείας. Ήταν μέρος μιας δοκιμής που εγκρίθηκε από το FDA και τη Συμβουλευτική Επιτροπή Ανασυνδυασμένου DNA (RAC) του NIH. Η δοκιμή περιλάμβανε μόνο μία άλλη ασθενή, τη Σίνθια Κάτσαλ. Η Cynthia ξεκίνησε θεραπεία στις 31 Ιανουαρίου 1991, όταν ήταν εννέα ετών.
Οι ερευνητές άντλησαν αίμα και από τα δύο κορίτσια, επάγοντας τα Τ κύτταρα από το αίμα τους να αναπαραχθούν στην καλλιέργεια. Οι ρετροϊικοί φορείς που εγχύθηκαν με λειτουργικά γονίδια ADA μεταφέρθηκαν στα καλλιεργημένα Τ κύτταρα. Τα γονιδιακά διορθωμένα Τ κύτταρα επανεισάγονται στα κορίτσια περίπου 12 ημέρες μετά την άντληση αίματος. Η DeSilva έλαβε 11 εγχύσεις σε διάστημα περίπου δύο ετών, σε σύγκριση με 12 εγχύσεις της Cutshall σε διάστημα 18 μηνών.
Η δοκιμή, η οποία πραγματοποιήθηκε στο Κλινικό Κέντρο του NIH, καθοδηγήθηκε από τον W. French Anderson, MD, μέλος του Εθνικού Ινστιτούτου Καρδιάς, Πνευμόνων και Αίματος του NIH, τον R. Michael Blaese, MD, επικεφαλή του Τμήματος Κυτταρικής Ανοσολογίας του Εθνικού Ινστιτούτου Καρκίνου του NIH (NCI) και τον Κένεθ Κάλβερ, MD, επίσης μέλος του NCI, στο εργαστηρίου του Δρ. Michael Blaese. Οι ερευνητές χρησιμοποίησαν έναν ρετροϊικό φορέα ADA που κατασκευάστηκε και παρασχέθηκε από τον A. Dusty Miller, Ph.D., του Κέντρου Καρκίνου “Fred Hutchinson” στο Σιάτλ.
«Βασικά δείξαμε ότι μπορούσαμε να το κάνουμε αυτό, θα μπορούσαμε να το κάνουμε με ασφάλεια και θα μπορούσαμε να έχουμε θετικό αντίκτυπο στους ασθενείς», δήλωσε ο Δρ Blaese, ο οποίος ήταν επίσης αναπληρωτής επικεφαλής του Κλάδου Μεταβολισμού του NCI, στο GEN. «Δεν ήταν μια θεραπευτική δοκιμή, αλλά ήταν σίγουρα μια αποτελεσματική θεραπεία και νομίζω ότι άνοιξε την πόρτα για μερικές πολύ επιτυχημένες δοκιμές που έχουν θεραπεύσει ασθενείς από μια σειρά ασθενειών».
Η μεταφορά του γονιδίου
Ένα κλειδί για την επιτυχία της δοκιμής του 1990, είπε ο Δρ Blaese, ήταν η κατανόηση του τρόπου μεταφοράς του διορθωμένου γονιδίου στους ασθενείς. Ως μοριακός αιματολόγος, ο Δρ Anderson επικεντρώθηκε στην τοποθέτηση του διορθωμένου γονιδίου σε βλαστοκύτταρα στον μυελό των οστών του ασθενούς, έτσι ώστε η ασθένεια να μπορεί να διορθωθεί μέσω μεταμόσχευσης βλαστικών κυττάρων. Αλλά αυτό αποδείχθηκε πολύ πιο δύσκολο από ό, τι αρχικά πίστευαν.
«Το να μπει το γονίδιο στο βλαστικό κύτταρο του μυελού των οστών και στη συνέχεια να διαφοροποιηθεί για να γίνει ένα ώριμο Τ κύτταρο που εξέφραζε το γονίδιο, απλώς συνέχισε να μας ταλαιπωρεί», θυμάται ο Δρ Blaese. «Θα μπορούσαμε να επιτύχουμε γονιδιακή έκφραση σε χαμηλά επίπεδα, αλλά ποτέ δεν ήταν σε ένα επίπεδο που θα ήταν θεραπευτικά χρήσιμη».
Ενώ εξέτασε πώς να ξεπεράσει αυτή τη δυσκολία, ο Δρ Blaese έκανε μια κριτική παρατήρηση. Είδε ότι ένας άλλος συνάδελφος του NCI είχε χρησιμοποιήσει έναν διαφορετικό ρετροϊό για να μετατρέψει σε αθάνατα τα Τ κύτταρα. Ο συνάδελφος ήλπιζε να προωθήσει την έρευνα για τα φάρμακα που θα έκαναν τα Τ κύτταρα ανθεκτικά στη μόλυνση από τον ιό HIV, αλλά ο Δρ Blaese είχε μια διαφορετική ιδέα. «Συνειδητοποίησα», είπε, «ότι ίσως θα μπορούσαμε να χρησιμοποιήσουμε το ίδιο τέχνασμα για να μετατρέψουμε σε αθάνατα Τ κύτταρα από μερικά από αυτά τα παιδιά με ανεπάρκεια ADA».
Οι Blaese και Anderson άρχισαν να εργάζονται το 1985 για να διορθώσουν κύτταρα από ασθενείς με ανεπάρκεια ADA σε ιστοκαλλιέργεια, χρησιμοποιώντας έναν ρετροϊό για να μεταφέρουν το διορθωμένο γονίδιο ADA στα κύτταρα. Αφού οι μεταφορές στο μυελό των οστών δεν παρήγαγαν αρκετά κύτταρα για μια αποτελεσματική θεραπεία, οι ερευνητές επέλεξαν τα Τ κύτταρα, με αποτέλεσμα έναν πολύ μεγαλύτερο αριθμό διορθωμένων γονιδίων που προσλαμβάνονται από τα κύτταρα.
Παίρνοντας ιδέες από την Ανοσο-Ογκολογία
Οι ερευνητές επικοινώνησαν επίσης με τον επικεφαλής χειρουργικής του NCI, Steven A. Rosenberg, MD, Ph.D. που χρησιμοποιούσε εγχύσεις αυτόλογων λεμφοκυττάρων διήθησης όγκων (TILs) ως μορφή ανοσοθεραπείας.
«Κατόπιν αιτήματός μου, ο Steve συμφώνησε να ενσωματώσει ένα γονίδιο ρετροϊικού δείκτη για την παρακολούθηση της κατανομής και της επιβίωσης των εγχυμένων TILs στους καρκινοπαθείς του», δήλωσε ο Δρ Blaese.
Σε συνεργασία με τον Δρ Rosenberg, οι Blaese και Anderson ανέπτυξαν TILs από πέντε ασθενείς με κακοήθες μελάνωμα και στη συνέχεια χρησιμοποίησαν τον ρετροϊικό φορέα LNL6 για να βάλουν έναν δείκτη DNA σε αυτά τα κύτταρα. Τα επισημασμένα TILs επέτρεψαν στους ερευνητές να μάθουν ποια λειτούργησαν καλύτερα για την καταπολέμηση του καρκίνου – αλλά εξίσου σημαντικό, ότι ο κατασκευασμένος ιός θα μπορούσε να χρησιμοποιηθεί με ασφάλεια στον άνθρωπο.
Οι Blaese, Anderson και Rosenberg υπέβαλαν το πρωτόκολλο γονιδίων δείκτη TIL ως το πρώτο επίσημο πρωτόκολλό τους στην Υποεπιτροπή Ανθρώπινης Γονιδιακής Θεραπείας του RAC και στη συνέχεια στο πλήρες RAC και το FDA. Όταν αυτή η ανασκόπηση απέδειξε ότι η ρετροϊική τεχνολογία μεταφοράς γονιδίων είναι ασφαλής και αποτελεσματική, οι ερευνητές ήταν έτοιμοι να υποβάλουν το πρωτόκολλο ADA T λεμφοκυττάρων, δήλωσε ο Δρ Blaese.
Βελτίωση του πρωτοκόλλου ADA
Το πρωτόκολλο ADA αναθεωρήθηκε δώδεκα φορές από επτά ρυθμιστικές επιτροπές πριν εγκριθεί τελικά από το RAC τον Ιούλιο του 1990 και από το FDA δύο μήνες αργότερα.
Η Maria Grazia Roncarolo, MD, επικεφαλής του Τμήματος Παιδιατρικής Μεταμόσχευσης Βλαστοκυττάρων και Αναγεννητικής Ιατρικής στο Stanford Medicine, δήλωσε στο GEN ότι μεταξύ των συμπερασμάτων που πήρε η ερευνητική της ομάδα από τη δοκιμή του 1990 ήταν ότι η εισαγωγή ενός γονιδίου σε ώριμα Τ κύτταρα δεν ήταν αρκετή για να παράγει αρκετό ένζυμο.
«Για να θεραπεύσουμε τον ασθενή, έπρεπε να διορθώσουμε το γονίδιο στο επίπεδο των βλαστοκυττάρων του αίματος, να έχουμε το διορθωμένο γονίδιο σε περισσότερες από μία κυτταρικές σειρές και να δημιουργήσουμε χώρο για τα διορθωμένα βλαστοκύτταρα στον μυελό των οστών του ασθενούς», εξήγησε. «Οι ερευνητές έμαθαν ότι αν θέλουμε να κάνουμε in vivo γονιδιακή θεραπεία, να εγχέουμε τους φορείς απευθείας στον ασθενή, πρέπει να είμαστε πολύ, πολύ προσεκτικοί σχετικά με τη δόση – και επίσης την καθαρότητα του φορέα».
«Εδώ στέκομαι»: Ο πρώτος ασθενής θυμάται την επιτυχημένη δοκιμή του 1990
Η Ashanti DeSilva, η πρώτη ασθενής για την οποία η χρήση της γονιδιακής θεραπείας εγκρίθηκε από το FDA και το RAC του NIH, έχει λίγες αναμνήσεις από τη γονιδιακή της θεραπεία το 1990, αλλά πολλές από τον R. Michael Blaese, MD, ο οποίος συνηγήθηκε της δοκιμής ορόσημο, την παρακολούθησε για χρόνια μετά τη δοκιμή και με τον οποίο παρέμεινε σε επαφή μέχρι την ενηλικίωση.
«Ήταν ο πιο ευγενικός άνθρωπος, αλλά τον θυμάμαι να λέει μια φορά ότι πρέπει να παραμείνω σε αυτές τις ενέσεις για το υπόλοιπο της ζωής μου για προληπτικούς λόγους. Και θυμάμαι απλώς να δακρύζω, παρόλο που οι ενέσεις δεν με είχαν ενοχλήσει ποτέ πραγματικά», είπε η DeSilva.
Μαθαίνοντας για τη διάγνωσή της με SCID, η DeSilva μοιράστηκε πέρυσι στο ιστολόγιό της, «οι γονείς μου έλαβαν τελικά μια απάντηση ως προς το γιατί δεν μπορούσα να περπατήσω περισσότερο από μερικά βήματα χωρίς να καταρρεύσω και γιατί αντιμετώπιζα συνεχώς λοιμώξεις χωρίς πλήρη ανάρρωση».
«Η γονιδιακή θεραπεία δεν ήταν η θεραπεία που όλοι ελπίζαμε, αλλά ο αριθμός των κυττάρων μου συνέχισε να αυξάνεται», πρόσθεσε. «Αν ρωτήσετε τους γονείς μου ή εμένα θα έλεγα με σιγουριά πως λειτούργησε, γιατί σε αντίθεση με την μοίρα μου που γράφτηκε με τη διάγνωσή μου, εγώ στέκομαι όρθια ».
Η DeSilva συνέχισε τις σπουδές της αποκτώντας μεταπτυχιακό στη δημόσια διοίκηση από το Πανεπιστήμιο του Οχάιο και στη συνέχεια άρχισε να ακολουθεί καριέρα στη γενετική συμβουλευτική. Αυτό απαιτούσε μαθήματα φυσικών επιστημών, τα οποία της έδωσαν μια καλύτερη κατανόηση της ασθένειάς της – και την έκαναν αρκετά άνετη για να μιλήσει δημόσια για το SCID και τη γονιδιακή θεραπεία της, ξεκινώντας από το Εθνικό Συνέδριο του IDF το 2013.
Σήμερα η DeSilva είναι παντρεμένη και ζει στο Σικάγο ως γενετική σύμβουλος. Αυξάνει την ευαισθητοποίηση για πρωτογενείς ανοσολογικές ανεπάρκειες μέσω του Immune Deficiency Foundation (IDF), ενός εθνικού μη κερδοσκοπικού οργανισμού ασθενών που επικεντρώνεται στις πρωτογενείς ασθένειες ανοσοανεπάρκειας, ενώ μοιράζεται τις εμπειρίες της σε ένα blog για το Global Genes Project, έναν οργανισμό υπεράσπισης σπάνιων και γενετικών ασθενειών.
Η DeSilva πιστώνει στην οικογένεια και στους φίλους την βοήθεια να αντιμετωπίσει την πρόκληση της εξισορρόπησης της ανάγκης να συνεχίσει τις θεραπείες και να ανταποκριθεί στις ασθένειες που προέκυψαν, με την επιθυμία της να διατηρήσει μια όσο το δυνατόν πιο φυσιολογική ζωή.
«Πολλές φορές, είχα κάμερες τηλεοπτικών δικτύων να με ακολουθούν στο σχολείο. Και ήμουν εξαιρετικά συνειδητοποιημένη», θυμάται η ΝτεΣίλβα. «Έπρεπε να δαπανώ πολύ χρόνο μακριά από το σχολείο. Αν έπρεπε να νοσηλευτώ, τους έλεγα απλώς να βάλουν το καθετήρα στο αριστερό μου χέρι επειδή είμαι δεξιόχειρας και οι γονείς μου έφερναν τη σχολική εργασία μου, έτσι ώστε να επέστρεφα σαν να μην έχασα μια μέρα.
«Είναι λίγο δύσκολο για οποιονδήποτε με χρόνια πάθηση να πρέπει να υπερασπίζεται συνεχώς την ασθένειά του εάν πρέπει να χάσει το σχολείο ή τη δουλειά, αλλά κάνεις το καλύτερο που μπορείς. Μερικοί άνθρωποι έχουν μεγαλύτερη κατανόηση από άλλους», δήλωσε η ΝτεΣίλβα.
https://www.youtube.com/watch?v=GRPrTrDRyFI&t=8s
